| 崔婷婷1, 2, 杜立新3, 彭 琦2, 张 杰2, 高继国1*, 宋福平2*.苏云金芽胞杆菌cry8Ea启动子区orf1片段缺失增强启动子活性[J].植物保护,2019,45(1):30-36. |
| 苏云金芽胞杆菌cry8Ea启动子区orf1片段缺失增强启动子活性 |
| Deletion of the orf1 fragment from the cry8Ea promoter region enhances the transcriptional activity in Bacillus thuringiensis |
| 投稿时间：2018-03-30 修订日期：2018-04-26 |
| DOI：S 476.11 |
| 中文关键词: 苏云金芽胞杆菌 cry基因启动子 转录活性 Cry晶体蛋白 晶体蛋白表达 |
| 英文关键词:Bacillus thuringiensis cry gene promoter transcriptional activity crystal protein expression of crystal protein |
| 基金项目:国家重点研发计划(2017YFD0200400); 国家自然科学基金重点基金(31530095) |
| 作者 | 单位 | | 崔婷婷1, 2, 杜立新3, 彭 琦2, 张 杰2, 高继国1*, 宋福平2* | 1. 东北农业大学生命科学学院, 哈尔滨 150030
2. 中国农业科学院植物保护研究所, 植物病虫害生物学国家重点实验室, 北京 100193
3. 河北省农林科学院植物保护研究所, 保定 071000 |
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| 中文摘要: |
| 本文分别构建了cry8E基因上游的启动子(Porf18E)和其上游缺失orf1基因的启动子(PΔorf18E)融合lacZ基因的表达载体, 通过β-半乳糖苷酶活性的分析, 发现PΔorf18E的转录活性高于Porf18E。分别用PΔorf18E和Porf18E指导cry1Ac基因的表达, 通过光学显微镜观察, 发现两个启动子指导表达的Cry1Ac蛋白均可形成双锥形晶体; 通过总蛋白定量分析发现, 缺失orf1基因的启动子(PΔorf18E)指导的Cry1Ac蛋白表达量高于Porf18E启动子指导的Cry1Ac蛋白表达量; 生物活性测定表明:PΔorf18E指导的Cry1Ac晶体蛋白对小菜蛾Plutella xylostella具有杀虫活性, 高于Porf18E指导的Cry1Ac晶体蛋白对小菜蛾的杀虫活性。本文获得的强活性的启动子PΔorf18E是目前已报道的转录活性最高的cry基因启动子, 该启动子为Cry蛋白的表达和遗传工程菌株构建提供了重要元件。 |
| 英文摘要: |
| The cry8E promoter (Porf18E) and the promoter (PΔorf18E) with the deletion of orf1 fragment, located upstream of cry8E, were fused with lacZ gene. The transcriptional activity of PΔorf18E was higher than that of Porf18E. The expression of Cry1Ac was directed by PΔorf18E and Porf18E, and the strains HD-(Porf18E-1Ac) and HD-(PΔorf18E-1Ac) were obtained. Both strains could produce the typical bipyramidal crystals, while HD-(PΔorf18E-1Ac) strain produced more Cry1Ac, which was more toxic to Plutella xylostella than HD-(Porf18E-1Ac). PΔorf18E has the highest transcriptional activity in cry gene promoters. It provides an important element for construction of engineered Bt strains. |
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