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张杨1,张朝贤2,王金信1*,魏守辉2,黄红娟2*.牛筋草ISSR-PCR反应体系的建立与优化[J].植物保护,2012,38(3):90-94.

牛筋草ISSR-PCR反应体系的建立与优化

Establishment and optimization of ISSR-PCR reaction system for Eleusine indica

DOI：

中文关键词: 牛筋草 ISSR-PCR 正交设计单因子试验

英文关键词:Eleusine indica ISSR-PCR orthogonal design single factor test

基金项目:

作者	单位
张杨1,张朝贤2,王金信1,魏守辉2,黄红娟2	1. 山东农业大学植物保护学院，泰安271018；2. 中国农业科学院植物保护研究所，中国农业科学院杂草鼠害生物学与治理重点开放实验室，北京100193

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中文摘要:

以牛筋草地上组织为材料，采用正交优化和单因子试验两种方法对影响牛筋草ISSR PCR体系的Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度和DNA模板浓度5个因素进行优化试验，建立适合牛筋草ISSR PCR的反应体系。结果表明，牛筋草ISSR PCR反应体系的最佳条件为：Mg2+ 1.75 mmol/L，dNTP 0.4 mmol/L，Taq DNA聚合酶1 U/25 μL，引物0.3 μmol/L，模板DNA 80 ng/25 μL，10×PCR Buffer 2.5 μL/25 μL。利用优化体系进行牛筋草的ISSR PCR反应，可获得稳定性高、重复性好、背景清晰的电泳结果。

英文摘要:

The suitable ISSR PCR reaction system of Eleusine indica was established by optimizing the concentrations of Mg2+, dNTP, Taq DNA polymerase, primers and template DNA in the ISSR PCR reaction system with orthogonal test and single factor test. The best conditions were as followed: 1.75 mmol/L Mg2+, 0.4 mmol/L dNTP, 1 U/25 μL Taq DNA polymerase, 0.3 μmol/L primer, 80 ng/25 μL of DNA template and 2.5 μL/25 μL of 10×PCR Buffer. With the optimized ISSR-PCR reaction system, the good results with high stability, reproducibility and clear background of electrophoresis could be obtained.

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