| 王亚琴1*, 李宗迪1, 李晨羊1, 李云琴2, 胡涛1, 谢礼2, 周雪平1, 3.荧光蛋白mNeonGreen、mKOk作为FRET传能对在研究植物蛋白质互作中的应用分析[J].植物保护,2021,47(2):20-27. |
| 荧光蛋白mNeonGreen、mKOk作为FRET传能对在研究植物蛋白质互作中的应用分析 |
| Fluorescent proteins mNeonGreen and mKOk as a novel donor/acceptor pair for fluorescence resonance energy transfer in analyzing plant protein-protein interactions |
| 投稿时间：2019-12-31 修订日期：2020-02-26 |
| DOI：10.16688/j.zwbh.2019728 |
| 中文关键词: 蛋白质互作 荧光共振能量转移 mNeonGreen mKOk |
| 英文关键词:protein-protein interaction fluorescence resonance energy transfer mNeonGreen mKOk |
| 基金项目:浙江大学实验技术研究项目（SJS201809）; 国家自然科学基金（31972235） |
| 作者 | 单位 | E-mail | | 王亚琴1*, 李宗迪1, 李晨羊1, 李云琴2, 胡涛1, 谢礼2, 周雪平1, 3 | 1. 水稻生物学国家重点实验室, 浙江大学生物技术研究所, 杭州310058
2. 浙江大学农生环测试中心, 杭州310058
3. 中国农业科学院植物保护研究所, 北京100193 | yaqinwang@zju.edu.cn |
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| 中文摘要: |
| 蛋白质相互作用是蛋白质组学研究的重要方向之一, 对解析植物病原微生物与寄主植物之间的博弈具有十分重要的意义。荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer, FRET)作为一种新技术, 能够在活细胞的正常生理条件下进行检测, 并具有灵敏度高, 假阳性较低, 实验周期短的优势, 在研究蛋白质相互作用过程中得到了广泛的应用。本研究选取了2种新型的荧光蛋白mNeonGreen/mKOk作为FRET传能对, 并与传统的传能对CFP/YFP相比较, 证实mNeonGreen/mKOk背景干扰较低。通过构建并表达荧光蛋白与目标蛋白的融合蛋白, 利用FRET技术成功地在植物细胞中验证了蛋白质间的相互作用。本研究为FRET技术在植物细胞中的应用提供了更多的技术支持和借鉴。 |
| 英文摘要: |
| The protein-protein interaction is one of the most important fields in proteomics research, which plays an important role in understanding the molecular arms race between plant pathogens and host plants. As a new technology, fluorescence resonance energy transfer (FRET) technique has the advantages of high sensitivity, low false positive and short experiment period, and has been widely employed in detecting protein-protein interactions in living cells. In this work, two novel fluorescent proteins mNeonGreen and mKOk were used as a donor/acceptor pair for FRET assay. Compared with traditional fluorescent proteins pair CFP/YFP, mNeonGreen/mKOk pair had lower background interference. By constructing and expressing fusion proteins of fluorescent proteins and target proteins, protein-protein interactions were successfully demonstrated in plant cells by FRET. This study provides further technical support and reference for the application of FRET technique in plant cells. |
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